綠化夏季降低組培苗污染的五項措施
- 發(fā)布時間：2019-11-11
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在植物組織培養(yǎng)過程中，污染是不可避免的，但可以把污染控制在低限度內(nèi)。污染通常是由于環(huán)境不潔、培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料消毒不徹底、操作過程不慎、操作人員或工具帶菌而引起。組培污染既影響了繁殖速度，又增加了生產(chǎn)成本，嚴重時可造成培養(yǎng)材料的丟失，給組培繁殖帶來較大的損失。
污染的病原有細菌和真菌兩大類。夏季溫度高、濕度大，各種病原菌繁殖速度快，是組培污染的高發(fā)期，如果控制不好，導(dǎo)致污染嚴重，會造成較大的經(jīng)濟損失，甚至?xí)肮ΡM棄。因此，在夏季防止和降低污染是組培工作者的重要工作之一，應(yīng)予以足夠重視。根據(jù)多年實踐工作的積累，下面討論降低污染的五項有效措施。
1. 保持干凈整潔的環(huán)境是減少污染的基本要求.
組培室是一個微環(huán)境，保持這個微環(huán)境的干凈、整潔，能有效的防止污染。具體要做到：每周對整個組培室進行一次徹底的大掃除；接種室和培養(yǎng)室要求密閉、干燥，保持與外界環(huán)境相對隔絕的狀態(tài)，盡量減少與外界的空氣對流及微生物與塵埃的侵入?？刂坪霉?、溫、濕、氣等各種生態(tài)因子，夏季高溫、高濕時，要即時降溫和排濕；定期用消毒液對接種室和培養(yǎng)室內(nèi)的設(shè)備、墻壁及地面進行擦洗；經(jīng)常用 70%的酒精對接種室和培養(yǎng)室進行噴霧降塵；定期用紫外燈對接種室和培養(yǎng)室進行空氣消毒，每次開啟 30-50 分鐘；定期檢查超凈工作臺上的風(fēng)速和清洗過濾器。
2. 潔凈的培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基的徹底滅菌是減少污染的必然要求.
培養(yǎng)瓶、試管等容器和封口用的蓋子、耐高溫的塑料膜等物品在用前要經(jīng)過徹底清洗、晾干。配制好的培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即高壓蒸汽滅菌，即在1.1kg/cm2 的壓力，鍋內(nèi)溫度達到 121℃，持續(xù)保持 20-30 分鐘。經(jīng)滅菌后的培養(yǎng)基，放置 2-3 天，若培養(yǎng)基表面和內(nèi)部無任何細菌痕跡，確實證明已徹底滅菌，方可使用。
3. 嚴格規(guī)范且熟練的無菌操作過程是減少污染的關(guān)鍵.
在無菌操作過程中，工作人員嚴格按照無菌操作的要求，規(guī)范熟練地完成好每一個步驟，能有效地減少由操作引起的污染。具體要做到：
?。?）接種前，工作人員的雙手必須用肥皂水洗凈，進入接種室后換上工作服、戴上口罩，用 70%的酒精擦拭消毒雙手；
?。?）用 70%的酒精擦拭超凈工作臺，接種工具（如剪刀、手術(shù)刀、鑷子等）使用前要在 70%酒精中浸泡，再在火焰上灼燒，冷卻后使用；
?。?）在超凈工作臺上正確擺放接種用具、培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基，臺面上的東西不能堆放太多，以免影響氣流；
?。?）接種過程中應(yīng)避免他人來回走動，操作人員禁止談話，并盡量避免操作人員頭部伸入超凈工作臺的工作區(qū)內(nèi)；
?。?）培養(yǎng)瓶的開啟、接種材料的切割、分裝、封口等步驟要規(guī)范熟練，避免交叉污染；
?。?）每切割、轉(zhuǎn)接完一瓶母種材料后，要及時更換無菌紙，重新更換所用的接種工具，備兩套交替使用。
4. 培養(yǎng)材料（外植體和基礎(chǔ)母瓶）的嚴格篩選和徹底的表面消毒是減少污染的基礎(chǔ)工作.
選擇適宜的外植體材料常常是組培工作成敗的關(guān)鍵，通常選取生長健壯、無病斑的植株上的處于生長活躍狀態(tài)的幼嫩莖尖，尤以剛剛萌發(fā)的幼芽比較理想，可以大大減少材料的污染。夏季避免陰雨天在戶外采取外植體，因為陰雨天帶菌較多，在晴天采材料時，下午采取的外植體要比早晨采的污染少，因為材料經(jīng)過日曬后可殺死部分細菌或真菌。采集回來的外植體經(jīng)自來水清洗后，在超凈工作臺上對其進行徹底的表面消毒，在消毒過程中應(yīng)當正確選擇消毒劑的濃度和處理時間，做到既消毒徹底，又盡量減少由消毒劑引起的組織的死亡。基礎(chǔ)母瓶擴繁過程中，母瓶的選擇也至關(guān)重要，帶菌的母瓶不能再用作母種，避免污染的擴大，接種前，還應(yīng)用 70%酒精擦拭母瓶表面，以免開啟母瓶時，灰塵落入瓶中造成污染。
5. 污染物的正確處理是防止污染傳播蔓延的有效途徑.
組織培養(yǎng)中污染是經(jīng)常發(fā)生的，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物污染，應(yīng)對其進行及時處理，否則會導(dǎo)致培養(yǎng)室環(huán)境污染，造成污染的蔓延和相互傳染。首先立即把污染物從培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移出去，然后對其進行高壓消毒滅菌，再在離組培室較遠的地方清除滅過菌的污染的培養(yǎng)物，徹底清洗培養(yǎng)瓶，晾干后待用。
1. 保持干凈整潔的環(huán)境是減少污染的基本要求.
組培室是一個微環(huán)境，保持這個微環(huán)境的干凈、整潔，能有效的防止污染。具體要做到：每周對整個組培室進行一次徹底的大掃除；接種室和培養(yǎng)室要求密閉、干燥，保持與外界環(huán)境相對隔絕的狀態(tài)，盡量減少與外界的空氣對流及微生物與塵埃的侵入?？刂坪霉?、溫、濕、氣等各種生態(tài)因子，夏季高溫、高濕時，要即時降溫和排濕；定期用消毒液對接種室和培養(yǎng)室內(nèi)的設(shè)備、墻壁及地面進行擦洗；經(jīng)常用 70%的酒精對接種室和培養(yǎng)室進行噴霧降塵；定期用紫外燈對接種室和培養(yǎng)室進行空氣消毒，每次開啟 30-50 分鐘；定期檢查超凈工作臺上的風(fēng)速和清洗過濾器。
2. 潔凈的培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基的徹底滅菌是減少污染的必然要求.
培養(yǎng)瓶、試管等容器和封口用的蓋子、耐高溫的塑料膜等物品在用前要經(jīng)過徹底清洗、晾干。配制好的培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即高壓蒸汽滅菌，即在1.1kg/cm2 的壓力，鍋內(nèi)溫度達到 121℃，持續(xù)保持 20-30 分鐘。經(jīng)滅菌后的培養(yǎng)基，放置 2-3 天，若培養(yǎng)基表面和內(nèi)部無任何細菌痕跡，確實證明已徹底滅菌，方可使用。
3. 嚴格規(guī)范且熟練的無菌操作過程是減少污染的關(guān)鍵.
在無菌操作過程中，工作人員嚴格按照無菌操作的要求，規(guī)范熟練地完成好每一個步驟，能有效地減少由操作引起的污染。具體要做到：
?。?）接種前，工作人員的雙手必須用肥皂水洗凈，進入接種室后換上工作服、戴上口罩，用 70%的酒精擦拭消毒雙手；
?。?）用 70%的酒精擦拭超凈工作臺，接種工具（如剪刀、手術(shù)刀、鑷子等）使用前要在 70%酒精中浸泡，再在火焰上灼燒，冷卻后使用；
?。?）在超凈工作臺上正確擺放接種用具、培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基，臺面上的東西不能堆放太多，以免影響氣流；
?。?）接種過程中應(yīng)避免他人來回走動，操作人員禁止談話，并盡量避免操作人員頭部伸入超凈工作臺的工作區(qū)內(nèi)；
?。?）培養(yǎng)瓶的開啟、接種材料的切割、分裝、封口等步驟要規(guī)范熟練，避免交叉污染；
?。?）每切割、轉(zhuǎn)接完一瓶母種材料后，要及時更換無菌紙，重新更換所用的接種工具，備兩套交替使用。
4. 培養(yǎng)材料（外植體和基礎(chǔ)母瓶）的嚴格篩選和徹底的表面消毒是減少污染的基礎(chǔ)工作.
選擇適宜的外植體材料常常是組培工作成敗的關(guān)鍵，通常選取生長健壯、無病斑的植株上的處于生長活躍狀態(tài)的幼嫩莖尖，尤以剛剛萌發(fā)的幼芽比較理想，可以大大減少材料的污染。夏季避免陰雨天在戶外采取外植體，因為陰雨天帶菌較多，在晴天采材料時，下午采取的外植體要比早晨采的污染少，因為材料經(jīng)過日曬后可殺死部分細菌或真菌。采集回來的外植體經(jīng)自來水清洗后，在超凈工作臺上對其進行徹底的表面消毒，在消毒過程中應(yīng)當正確選擇消毒劑的濃度和處理時間，做到既消毒徹底，又盡量減少由消毒劑引起的組織的死亡。基礎(chǔ)母瓶擴繁過程中，母瓶的選擇也至關(guān)重要，帶菌的母瓶不能再用作母種，避免污染的擴大，接種前，還應(yīng)用 70%酒精擦拭母瓶表面，以免開啟母瓶時，灰塵落入瓶中造成污染。
5. 污染物的正確處理是防止污染傳播蔓延的有效途徑.
組織培養(yǎng)中污染是經(jīng)常發(fā)生的，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物污染，應(yīng)對其進行及時處理，否則會導(dǎo)致培養(yǎng)室環(huán)境污染，造成污染的蔓延和相互傳染。首先立即把污染物從培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移出去，然后對其進行高壓消毒滅菌，再在離組培室較遠的地方清除滅過菌的污染的培養(yǎng)物，徹底清洗培養(yǎng)瓶，晾干后待用。
